Fue una de las fundadoras de Madres de Plaza de Mayo. Ante el reclamo por la pronta aparición de sus hijos, secuestrados en la última dictadura militar, también ella fue desaparecida por un comando liderado por el marino Alfredo Astiz, mantenida en cautiverio y asesinada.

Azucena Villaflor fue una de las fundadoras de Madres de Plaza de Mayo. Quien, junto a otras madres, comenzó a reunirse en la plaza frente a la Casa Rosada reclamando la pronta aparición de sus hijos, secuestrados en la última dictadura militar.

El 30 de noviembre de 1976, ocho meses después del golpe de estado, uno de sus hijos, Néstor, y la novia de éste, Raquel Mangin, fueron secuestrados. Tras el silencio de gobernantes y funcionarios, Azucena inició las marchas en la plaza.

Ante este reclamo, Villaflor también fue desaparecida por un comando liderado por el marino Alfredo Astiz. Fue mantenida en cautiverio en la Escuela de Mecánica de la Armada junto con otros activistas por los Derechos Humanos y compañeras de Madres.

Azucena fue asesinada y sus restos fueron reconocidos en el año 2005 por el Equipo Argentino de Antropología Forense, ya que había sido sepultada en cercanías de Santa Teresita como NN cuando hallaron su cuerpo en el mar.